Здійснюється у цитоплазмі, з мембранами не пов'язаний. У ньому беруть участь ферменти; розщепленню піддається глюкоза і відбувається утворення двох молекул піровіноградної кислоти CH3COCOOH. 60% енергії розсіюється у вигляді тепла, а 40% – використовується для синтезу 2 молекул АТФ. Кисень не бере участі.